附件：雌激素受體、孕激素受體抗體試劑及檢測試劑盒技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2015年第11號）.doc

雌激素受體、孕激素受體抗體試劑及檢測試劑盒技術(shù)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對雌激素受體、孕激素受體抗體試劑及檢測試劑盒注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門審評注冊申報資料提供參考。

本指導(dǎo)原則是對雌激素受體、孕激素受體抗體試劑及檢測試劑盒的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進(jìn)行充實和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供申請人和審查人員使用的指導(dǎo)性文件，不涉及注冊審批所等行政事項，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進(jìn)行調(diào)整。

一、范圍

雌激素受體（Estrogen Receptor, ER）和孕激素受體（Progesterone Receptor, PR）是調(diào)節(jié)生殖系統(tǒng)及乳腺等器官細(xì)胞生長發(fā)育的重要分子，也是乳腺癌的重要生物標(biāo)記物。ER和PR的表達(dá)情況與患者的內(nèi)分泌治療效果相關(guān)。目前，ER、PR檢測廣泛應(yīng)用于乳腺癌患者的預(yù)后判斷與指導(dǎo)用藥。ER有兩種亞型, 分別是ERα和ERβ，兩者結(jié)構(gòu)相似，但在組織分布及生物學(xué)功能上不盡相同。其中ERβ于1996年首次發(fā)現(xiàn)，遠(yuǎn)晚于ERα，目前對于ERβ在組織中表達(dá)情況及調(diào)控作用尚不清晰。本指南所提及ER為ERα。

對ER和PR的準(zhǔn)確檢測，是乳腺癌患者接受恰當(dāng)治療的重要依據(jù)。我國相關(guān)乳腺癌診治指南已將ER、PR的免疫組織化學(xué)檢測列為乳腺癌患者的常規(guī)檢測項目，并用于指導(dǎo)患者的內(nèi)分泌治療。但目前ER、PR檢測在不同臨床檢測機構(gòu)之間、不同檢測試劑之間存在測定結(jié)果差異。檢測結(jié)果中存在一定比例的假陽性和假陰性結(jié)果。相關(guān)生產(chǎn)企業(yè)必須充分意識到該類產(chǎn)品的潛在風(fēng)險，根據(jù)本指導(dǎo)原則的要求，對該類試劑的安全性和有效性進(jìn)行科學(xué)合理的驗證。

雌激素受體、孕激素受體抗體試劑及檢測試劑盒是指利用免疫組織化學(xué)法，對病理組織切片中雌激素受體或孕激素受體進(jìn)行檢測的試劑。此類試劑為特異性單克隆或多克隆抗體，或抗體與顯色系統(tǒng)、對照試劑、質(zhì)控片（如有）及其它輔助試劑一同包裝成試劑盒形式的檢測試劑，用于乳腺癌患者的預(yù)后判斷、指導(dǎo)用藥及對其它腫瘤的鑒別診斷。

本指導(dǎo)原則僅包括雌激素受體、孕激素受體抗體試劑及檢測試劑盒注冊申報資料中部分項目的要求，適用于進(jìn)行產(chǎn)品注冊和相關(guān)許可事項變更的產(chǎn)品。其他未盡事宜（包括產(chǎn)品風(fēng)險分析資料等），應(yīng)當(dāng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）（以下簡稱《辦法》）等相關(guān)法規(guī)要求。

二、注冊申報資料要求

（一）綜述資料

內(nèi)容應(yīng)符合《辦法》和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）的相關(guān)要求，并建議申請人著重介紹以下幾方面內(nèi)容：

1.生物學(xué)特性，包括受體的基本結(jié)構(gòu)和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑；

2.組織分布與功能；

3.與疾病和治療的關(guān)系；

4.國際和國內(nèi)同類產(chǎn)品異同介紹，包括第一抗體克隆的選擇、顯色系統(tǒng)選擇、試驗方法和樣本處理等。

（二）主要原材料研究資料

1.以文獻(xiàn)的形式闡述ER/PR檢測的臨床意義。

2.第一抗體的詳細(xì)研究資料。

2.1 詳細(xì)的抗體性質(zhì)鑒定資料，包括：抗體的特異性、親和常數(shù)及效價、抗體的類型及亞型、抗體蛋白純度的驗證。對于企業(yè)自制抗體，還應(yīng)提供抗體識別位點的驗證。申請人可通過放射性免疫分析法、雙向瓊脂擴散法、酶聯(lián)免疫吸附法、免疫印跡法、凝膠電泳等方法進(jìn)行研究。

2.2 第一抗體的克隆選擇、制備、純化等詳細(xì)試驗資料,包括以下兩種情況：

2.2.1 企業(yè)自制抗體

2.2.1.1 詳述抗體克隆的選擇依據(jù)，可提交文獻(xiàn)資料或克隆選擇的試驗研究資料；

2.2.1.2 明確免疫源和抗原的性質(zhì)。

2.2.2 企業(yè)外購抗體

2.2.2.1 詳述抗體克隆的選擇依據(jù)，可提交文獻(xiàn)資料或克隆選擇的試驗研究資料（建議企業(yè)選擇已經(jīng)臨床充分驗證的克隆作為第一抗體）；

2.2.2.2 明確免疫源、抗原的性質(zhì)及外購方名稱；

2.2.2.3 提交外購方出具的抗體性能指標(biāo)及檢驗證書，詳述申請人對該抗體技術(shù)指標(biāo)的要求和申請人確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)。

3.酶標(biāo)第二抗體系統(tǒng)（如適用）的選擇及驗證資料。

檢測試劑盒中的第二抗體系統(tǒng)一般均為外購，應(yīng)詳述酶標(biāo)第二抗體系統(tǒng)的確定依據(jù)，明確外購方名稱，提交外購方出具的檢驗證書，詳述申請人對酶標(biāo)第二抗體系統(tǒng)相關(guān)主要原材料的技術(shù)指標(biāo)。

4.企業(yè)內(nèi)部質(zhì)控片及試劑盒配套質(zhì)控片（如適用）的研究資料。

詳述內(nèi)部質(zhì)控片的組成，包括組織類型、例數(shù)和強度。應(yīng)提供對內(nèi)部質(zhì)控片組織類型和強度的確定依據(jù)，建議采用臨床上普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類試劑進(jìn)行確認(rèn)。建議在試劑盒中設(shè)置弱陽性質(zhì)控品（如適用），以便更加靈敏的監(jiān)控試驗過程中可能出現(xiàn)的錯誤結(jié)果。

5.封閉液的研究資料。

封閉液應(yīng)能夠封閉非特異結(jié)合、內(nèi)源性酶活性或內(nèi)源性生物素等。

6.其他主要原輔料的選擇及驗證資料，如牛血清白蛋白、抗原修復(fù)液、抗菌劑等。

該類主要原輔料一般均為外購，應(yīng)說明有生物活性的原輔料的外購方名稱，提交外購方出具的檢驗證書，詳述申請人對每一原輔料的質(zhì)量要求。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。

2.第一抗體制備的詳細(xì)研究資料（如適用）。

3.產(chǎn)品基本反應(yīng)原理介紹。

4.詳述抗原修復(fù)方法的確定依據(jù)。

5.最適抗體滴度和抗體孵育時間確定的研究。

6.檢測體系反應(yīng)條件確定的研究：申請人應(yīng)考慮脫蠟水化、酶阻斷、抗體孵育、顯色、復(fù)染等各個步驟對產(chǎn)品性能的影響，通過試驗確定上述條件的最佳組合。常規(guī)免疫組織化學(xué)檢測步驟的確定，可引用行業(yè)和企業(yè)內(nèi)部規(guī)范性操作手冊或文獻(xiàn)，但應(yīng)對確定后的檢測步驟進(jìn)行性能驗證。

（四）分析性能評估資料

申請人應(yīng)提交在產(chǎn)品研制或成品驗證階段對試劑盒進(jìn)行的所有性能驗證的研究資料，包括具體研究方法、質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計分析等詳細(xì)資料。對于本類產(chǎn)品建議著重對以下分析性能進(jìn)行研究：

1.免疫反應(yīng)性

1.1 正常組織：對30種正常人體組織（見表1），每種組織類型不少于3例，進(jìn)行特異性評價，同時對著色位置及染色特點進(jìn)行描述。

表1：正常組織列表

1.2 非正常組織：對相關(guān)良性、惡性病變組織（見表2）進(jìn)行特異性評價，每種組織類型不少于3例。如有采用申報產(chǎn)品為試驗材料進(jìn)行研究的相關(guān)文獻(xiàn)資料，也可提交文獻(xiàn)資料驗證抗體試劑或檢測試劑盒與非正常組織的免疫反應(yīng)性。

表2：非正常組織列表

1.3 ER抗體試劑或ER檢測試劑應(yīng)對ERβ的交叉反應(yīng)進(jìn)行評價。可利用ERα和ERβ的分子量差異，采用免疫印記法或利用免疫組織化學(xué)方法對ERβ高表達(dá)、ERα不表達(dá)的組織樣本進(jìn)行免疫反應(yīng)性研究，驗證抗體的特異性。也可利用其它合理的方法進(jìn)行交叉反應(yīng)研究。

1.4 可選擇經(jīng)充分驗證的組織芯片或經(jīng)10%中性緩沖福爾馬林固定石蠟包埋的組織切片進(jìn)行免疫反應(yīng)性研究。應(yīng)明確樣本組織類型的確定方法，應(yīng)提供商業(yè)化組織芯片相關(guān)信息。

2.精密度

2.1 檢測內(nèi)精密度：對連續(xù)切片的乳腺癌樣本，進(jìn)行檢測重復(fù)性研究。包括染色強度、陽性細(xì)胞百分比及著色位置。

2.2 檢測間精密度：對可能影響檢測精密度的主要變量進(jìn)行驗證，包括批次（不少于3批次）、適用機型、操作方法（手工/自動）、檢測時間和操作人員。

2.3 建議對不同染色強度、不同陽性細(xì)胞百分比及ER/PR陰性的乳腺癌樣本進(jìn)行包含染色位置，染色強度和陽性細(xì)胞百分比數(shù)的精密度研究。

3.靈敏度

建議申請人對不少于5例ER/PR弱陽性樣本（1%-%—10%）進(jìn)行靈敏度評價。

4.參加國內(nèi)外質(zhì)控機構(gòu)的質(zhì)控活動情況

建議企業(yè)積極參加國內(nèi)（衛(wèi)生計生委病理質(zhì)控評價中心）、國際質(zhì)控機構(gòu)（NordiQC、UK NEQUAS、CAP等）的質(zhì)控活動，并提交質(zhì)控結(jié)果報告。

（五）陽性判斷值資料

提交最新的國際、國內(nèi)診療指南等相關(guān)文獻(xiàn)資料。提交染色特點的研究資料，包括陽性樣本著色顏色、染色部位、背景信息及不同強度陽性組織的染色特點。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者應(yīng)至少包括實時穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性、機載穩(wěn)定性（如適用）和稀釋穩(wěn)定性（如適用）研究。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少3批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。樣本穩(wěn)定性研究至少包括切片在不同儲存條件下的穩(wěn)定性研究。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果應(yīng)分別在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】項中進(jìn)行詳細(xì)說明。

（七）臨床試驗

1.試驗方法

選擇已批準(zhǔn)上市，臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好，如該抗體克隆經(jīng)過國際權(quán)威機構(gòu)（如NordiQC等）年度評分成績較好的同品種產(chǎn)品，作為對比試劑。采用試驗用體外診斷試劑與之進(jìn)行比較研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效。

計算所有檢測乳腺癌樣本中ER或PR陽性比例，間接驗證ER及PR的檢測有效性。對于第一抗體選擇未經(jīng)充分臨床驗證克隆的PR檢測試劑，還應(yīng)對不少于200例乳腺癌樣本同時進(jìn)行ER、PR檢測，分別計算陽性比例并對出現(xiàn)的ER(-)/PR(+)樣本，用其他合理的方法進(jìn)行復(fù)核并分析原因。

對于預(yù)期用途中已明確配合具體治療藥物名稱的ER、PR檢測試劑，應(yīng)采用聯(lián)合藥物評價臨床試驗的形式，同時評價檢測結(jié)果與接受治療后臨床預(yù)后的相關(guān)性和試驗用體外診斷試劑與對比試劑檢測的一致性。

2.臨床試驗機構(gòu)的選擇

申請人應(yīng)選定不少于3家(含3家) 臨床試驗機構(gòu)開展臨床試驗。臨床試驗機構(gòu)應(yīng)獲得國家食品藥品監(jiān)督管理總局資質(zhì)認(rèn)可。盡量使各臨床試驗機構(gòu)的臨床樣本有一定的區(qū)域代表性。臨床試驗機構(gòu)應(yīng)具有嚴(yán)格的質(zhì)量管理體系，執(zhí)行實驗室內(nèi)部日常質(zhì)量控制，參加國家病理以及國際病理質(zhì)控機構(gòu)的質(zhì)控活動。

3.臨床試驗方案

3.1 各臨床試驗機構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應(yīng)在臨床試驗機構(gòu)的實驗室內(nèi)并由本實驗室的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉試驗進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

3.2 以圖表的形式對試驗總體設(shè)計及工作流程進(jìn)行描述。圖表中應(yīng)包括連續(xù)切片的數(shù)量及用途分配等。

3.3 試驗方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除選擇標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床試驗都應(yīng)記錄在案，并明確說明原因。各臨床試驗機構(gòu)選用的對比試劑應(yīng)保持一致，以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計學(xué)分析。

3.4 試驗方案中應(yīng)明確閱片者、操作者的選擇標(biāo)準(zhǔn)。閱片者應(yīng)選擇在免疫組織化學(xué)和乳腺癌病理診斷中有豐富經(jīng)驗的病理科醫(yī)生。

3.5 在試驗操作過程中和判定檢測結(jié)果時應(yīng)采用盲法以保證試驗結(jié)果的客觀性。臨床試驗研究方案中應(yīng)詳述盲法的具體操作流程。

3.6 臨床試驗前申請人應(yīng)對臨床試驗機構(gòu)參與人員進(jìn)行相關(guān)技術(shù)培訓(xùn)，并采用統(tǒng)一判讀標(biāo)準(zhǔn)等手段，保持各臨床試驗機構(gòu)的判讀一致性。

3.7 在整個試驗中，試驗用體外診斷試劑和對比試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。臨床試驗研究方案中應(yīng)明確內(nèi)部質(zhì)控的方法及配合用陰性質(zhì)控試劑的詳細(xì)信息。

4.病例選擇及樣本類型

臨床試驗應(yīng)選擇經(jīng)10%中性緩沖福爾馬林固定石蠟包埋乳腺癌組織樣本或乳腺癌組織芯片。樣本例數(shù)不低于1000例，陽性樣本例數(shù)不應(yīng)少于300例，其中陽性樣本應(yīng)包含不同陽性細(xì)胞百分比，弱陽性樣本不少于10例。如適用冰凍樣本，也需在不少于2家臨床試驗機構(gòu)進(jìn)行臨床試驗，且至少滿足冰凍樣本總例數(shù)不少于200例，陽性樣本例數(shù)不應(yīng)少于60例，弱陽性樣本不少于5例。

如試劑可用于鑒別診斷，臨床試驗還應(yīng)選擇乳腺癌、消化道腫瘤、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌等組織樣本?？倶颖纠龜?shù)不少于500例，其中陽性樣本例數(shù)不應(yīng)少于150例。

若抗體試劑適用于不同檢測體系，如配合使用的第二抗體、顯色劑等，則不同檢測體系（包括不同組合）均需在一種檢測體系滿足臨床試驗最低例數(shù)要求的前提下，增加的另外檢測體系應(yīng)在不少于2家臨床試驗機構(gòu)完成至少200例臨床樣本的試驗，且選擇的臨床樣本應(yīng)包含一定比例的陽性樣本。

如抗體試劑包含濃縮型與即用型兩種劑型，在一種劑型滿足臨床試驗最低例數(shù)要求的前提下，另一種劑型，應(yīng)在不少于2家臨床試驗機構(gòu)完成至少200例臨床樣本的試驗，且選擇的臨床樣本應(yīng)包含一定比例的陽性樣本。

5.統(tǒng)計學(xué)分析

對臨床試驗結(jié)果的統(tǒng)計應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計方法，對于本類檢測試劑比較研究試驗的一致性研究，常選擇配對2×2表的形式總結(jié)兩種試劑的定性檢測結(jié)果，計算陽性符合率、陰性符合率和總符合率，選擇合適的統(tǒng)計學(xué)方法計算95%置信區(qū)間，同時對定性結(jié)果進(jìn)行χ2檢驗或kappa檢驗，以檢驗兩種檢測試劑檢測結(jié)果的一致性。

鑒于檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性對患者的診治影響巨大，假陰性結(jié)果將直接導(dǎo)致患者失去接受相關(guān)激素藥物治療的機會，而假陽性結(jié)果則使得患者接受不必要的治療，在造成巨大的醫(yī)療資源浪費的同時，患者還需承受藥物帶來的嚴(yán)重不良反應(yīng)。因此建議與比對試劑的陽性符合率和陰性符合率應(yīng)分別不低于90%和95%。

用試驗用體外診斷試劑及對比試劑陽性細(xì)胞百分比做散點圖的方法，配合適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計分析方法，如Pearson相關(guān)分析等，計算相關(guān)系數(shù)，評價試驗用體外診斷試劑與對比試劑在陽性細(xì)胞百分比上的檢測一致性。

對于本類檢測試劑與對比試劑染色強度的一致性研究，結(jié)果應(yīng)采用R×C列聯(lián)表的形式給出，并計算不同染色強度的符合率及總符合率，給出總符合率的95%可信區(qū)間，采用Kappa檢驗以檢驗兩種檢測試劑染色強度的一致性，并給出Kappa統(tǒng)計量值及P值。

6.結(jié)果差異樣本的驗證

在數(shù)據(jù)收集過程中，對兩種試劑檢測結(jié)果不一致的樣本，應(yīng)采用其他合理的方法進(jìn)行復(fù)核，同時對切片的染色特點及差異產(chǎn)生原因進(jìn)行分析。

7.質(zhì)量控制

由于免疫組化實驗前處理步驟較多，導(dǎo)致判讀結(jié)果可能會在實驗人員間、實驗室間產(chǎn)生差異。為了客觀單一評價試劑性能，盡量減少這種人為差異對最終結(jié)果造成的影響，臨床試驗開始前，各臨床試驗機構(gòu)應(yīng)進(jìn)行判讀一致性試驗及統(tǒng)一的質(zhì)量控制，統(tǒng)一操作步驟，確保同樣的染色片在不同醫(yī)院的判讀結(jié)果保持一致。該預(yù)評估內(nèi)容、實現(xiàn)方法、結(jié)果等應(yīng)在臨床試驗報告中體現(xiàn)。

8.原始數(shù)據(jù)

8.1 提交病例報告表（Case Report Form, CRF），內(nèi)容應(yīng)至少包括：性別、年齡、病理診斷結(jié)果、試驗用體外診斷試劑檢測陽性細(xì)胞百分比和染色強度、對比試劑檢測陽性細(xì)胞百分比和染色強度。陽性細(xì)胞百分比可取整到每10%為一個等級，<10%的應(yīng)盡量細(xì)化。

8.2 提交入選樣本染色代表性彩色圖片，并對染色特點包括組織形態(tài)、染色強度和背景染色特點進(jìn)行簡要評述。

9.臨床試驗總結(jié)報告撰寫

根據(jù)《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，臨床試驗報告應(yīng)對試驗的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點給予清晰、完整的闡述，應(yīng)對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。建議在臨床試驗總結(jié)報告中對以下內(nèi)容進(jìn)行詳述：

9.1 臨床試驗總體設(shè)計及方案描述

9.1.1 臨床試驗的整體管理情況、臨床試驗機構(gòu)選擇、臨床主要試驗人員的選擇、人員簡介等基本情況介紹；

9.1.2 病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)、標(biāo)本的選擇例數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)；

9.1.3 樣本類型，樣本的收集、處理及保存等；

9.1.4 陰、陽性判讀標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)計學(xué)方法、統(tǒng)計軟件、評價統(tǒng)計結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。

9.2 臨床試驗具體情況

9.2.1 試驗用體外診斷試劑和對比試劑的名稱、批號、有效期等信息；

9.2.2 對各臨床試驗機構(gòu)的病例數(shù)、人群分布情況進(jìn)行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比；

9.2.3 質(zhì)量控制，試驗人員培訓(xùn)、質(zhì)控品檢測情況，對檢測結(jié)果判讀的抽查結(jié)果評估；

9.2.4 具體試驗過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存、結(jié)果不一致樣本的驗證等。

9.3 臨床試驗結(jié)果及分析

9.3.1 數(shù)據(jù)預(yù)處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測或采用其他合理的方法進(jìn)行復(fù)核及無法評估樣本的描述處理、試驗過程中是否涉及對方案的修改。

9.3.2 結(jié)果的一致性分析

計算陽性符合率、陰性符合率、總體符合率及其95%（或99%）的置信區(qū)間。采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計學(xué)方法，對定性檢測試劑進(jìn)行一致性評價，對半定量檢測試劑進(jìn)行線性相關(guān)性分析。

9.4 討論和結(jié)論

對總體結(jié)果進(jìn)行總結(jié)性描述并簡要分析試驗結(jié)果，對本次臨床試驗的特別說明（如有），最后得出臨床試驗結(jié)論。

（八）產(chǎn)品技術(shù)要求

擬定產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《辦法》和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》的相關(guān)規(guī)定，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）要求編寫。

雌激素受體、孕激素受體抗體試劑及檢測試劑盒的產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)主要包括以下性能指標(biāo)：外觀、符合性、批內(nèi)重復(fù)性、批間重復(fù)性、穩(wěn)定性等。如擬申報試劑已有相應(yīng)的國家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，則產(chǎn)品技術(shù)要求不得低于上述標(biāo)準(zhǔn)要求。另外，產(chǎn)品技術(shù)要求中應(yīng)以附錄形式明確主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求。

（九）注冊檢驗

根據(jù)《辦法》要求，首次申請注冊的第三類產(chǎn)品應(yīng)在國家食品藥品監(jiān)督管理總局認(rèn)可的、具有相應(yīng)承檢范圍的醫(yī)療器械檢測機構(gòu)進(jìn)行連續(xù)3個生產(chǎn)批次樣品的注冊檢驗。對于已經(jīng)有國家參考品的項目，在注冊檢驗時應(yīng)采用相應(yīng)的國家參考品進(jìn)行檢驗；對于目前尚無國家參考品的項目，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)自行建立穩(wěn)定的質(zhì)控體系并提供相應(yīng)的內(nèi)部參考品。

（十）產(chǎn)品說明書

產(chǎn)品說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、檢測方法及檢測結(jié)果解釋等重要信息，是指導(dǎo)實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)，是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求。

結(jié)合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，明確雌激素受體、孕激素受體抗體試劑及檢測試劑盒（免疫組織化學(xué)法）說明書的重點內(nèi)容，以指導(dǎo)注冊申報人員更合理地完成說明書編制。

1．【預(yù)期用途】

應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

1.1 試劑盒用于體外半定量和/或定性檢測經(jīng)10%中性緩沖福爾馬林固定石蠟包埋和/或冰凍組織切片中雌激素受體/孕激素受體。用于乳腺癌的預(yù)后判斷與指導(dǎo)用藥及對其它腫瘤的鑒別診斷。（注：與乳腺癌預(yù)后判斷及指導(dǎo)用藥相關(guān)的ER/PR檢測試劑，建議采用陽性細(xì)胞百分比數(shù)和染色強度的半定量形式出具報告。）

1.2 ER/PR陽性表達(dá)于細(xì)胞核內(nèi)。

1.3 介紹特異性結(jié)合位點。

1.4 簡單介紹ER/PR的生物學(xué)特征，如基本結(jié)構(gòu)和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。

1.5 簡單介紹ER/PR在乳腺癌預(yù)后判斷、用藥指導(dǎo)和鑒別診斷中的作用。

1.6 如未進(jìn)行與藥物聯(lián)合評價臨床試驗，則不應(yīng)涉及具體藥物產(chǎn)品（商品）名稱、生產(chǎn)企業(yè)信息等，并注明該產(chǎn)品未與具體藥物聯(lián)合進(jìn)行臨床評價。

1.7 明確說明對任何陽性或陰性結(jié)果的解讀，應(yīng)由病理科醫(yī)生結(jié)合病理形態(tài)學(xué)、臨床表現(xiàn)及其它檢測方法進(jìn)行，不作為單獨的診斷指標(biāo)。

2.【檢測原理】

簡述免疫組織化學(xué)的基本原理，并對申報試劑的抗原修復(fù)方法、第一抗體、放大系統(tǒng)、顯色系統(tǒng)及結(jié)果觀察等進(jìn)行簡要介紹。

3.【主要組成成分】

3.1 說明試劑盒包含組分的名稱、數(shù)量、比例或濃度等信息；質(zhì)控片（如有）的組織名稱。

3.2 對檢測中使用的抗體信息進(jìn)行簡單介紹，包括抗體的克隆性質(zhì)（單克隆或多克?。⒖贵w的類型（如IgG1)、抗體的種屬性、克隆號、抗體制備形式（如細(xì)胞培養(yǎng)上清液）、免疫源。

3.3 試劑盒中不包含但對該項檢測必需的組份，企業(yè)應(yīng)列出相關(guān)試劑的名稱、貨號及其他相關(guān)信息。

4.【儲存條件及有效期】

對試劑的儲存條件、有效期、開封穩(wěn)定性、機載穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性和凍融次數(shù)限制等信息做詳細(xì)介紹。

5.【樣本要求】

重點明確以下內(nèi)容：

5.1 應(yīng)明確對適用樣本的取材、固定、包埋的具體要求。此部分內(nèi)容可參考《美國臨床腫瘤學(xué)會和美國病理學(xué)家學(xué)會乳腺癌雌激素/ 孕激素受體免疫組化檢測指南》或國內(nèi)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)操作性文件內(nèi)容進(jìn)行編寫或引用。

5.2 明確樣本的穩(wěn)定性。

6.【檢測方法】

詳細(xì)說明操作的各個步驟：

6.1 明確檢測需要的儀器、設(shè)備。如預(yù)處理儀、染色儀等。注明貨號及生產(chǎn)商。

6.2 試劑配制方法、注意事項，試劑開封、配制后使用方法及注意事項等。

6.3 手工操作應(yīng)詳述脫蠟和水化、組織抗原修復(fù)、第一抗體孵育、顯色等各操作步驟。描述應(yīng)盡量細(xì)化，需明確各步驟處理時間及pH值等內(nèi)容。如第一抗體為濃縮型抗體，還需明確抗體工作液的濃度及稀釋液的詳細(xì)信息。

6.4 質(zhì)量控制：明確每一批次檢測樣本均應(yīng)同時進(jìn)行內(nèi)、外陽性/陰性質(zhì)控染色及空白對照對比。質(zhì)控應(yīng)包含從強陽性到陰性不同ER/PR濃度水平的細(xì)胞系細(xì)胞或不同ER/PR表達(dá)水平（染色強度）的乳腺癌組織切片，其中應(yīng)包括至少一個中等陽性強度質(zhì)控或弱陽性乳腺癌組織切片。為用戶提供可作為陽性和陰性，內(nèi)、外對照的組織名稱。詳述質(zhì)控片制備的要求及質(zhì)控結(jié)果的要求（試驗有效性的判斷），以及質(zhì)控結(jié)果不符合要求的處理方式。

7.【陽性判斷值】（如適用）

根據(jù)相關(guān)指南及規(guī)范性文件，以陽性百分比的形式明確判讀參考值。

8.【檢驗結(jié)果的解釋】

配合彩色圖片對結(jié)果判讀進(jìn)行說明，彩色圖片應(yīng)至少包含不同級別陽性及陰性質(zhì)控片（如適用）的結(jié)果圖例。

明確陽性為細(xì)胞核著色，其它部位著色為非特異染色。明確顯色劑名稱及顯示顏色。

對可能出現(xiàn)的假陰性、假陽性情況進(jìn)行說明，并明確提出出現(xiàn)該情況后的處理方法。

9.【檢驗方法的局限性】

綜合產(chǎn)品的預(yù)期用途、臨床背景、檢測方法及適用范圍等信息，對可能出現(xiàn)的局限性進(jìn)行相關(guān)說明，主要包括以下描述，請申請人選擇適用的條款在產(chǎn)品說明書中予以闡述。

9.1 免疫組織化學(xué)檢測是一種需通過多個檢測步驟完成的診斷過程。在試劑的選擇、取材、固定、處理、切片的制備和染色結(jié)果的解釋上需要進(jìn)行專門的培訓(xùn)。

9.2 任何陽性或陰性結(jié)果的解讀，應(yīng)由病理科醫(yī)生結(jié)合病理形態(tài)學(xué)、臨床表現(xiàn)及其它檢測方法進(jìn)行，不作為單獨的診斷指標(biāo)。

9.3 復(fù)染過度或不足都可能影響結(jié)果的判讀。

9.4 不恰當(dāng)?shù)娜旧敖M織的處理過程直接影響染色效果，造成假陽性、抗體定位不準(zhǔn)確或假陰性結(jié)果。結(jié)果不一致可能是由樣本固定和包埋方法不同或組織樣本內(nèi)固有差異造成的。

9.5 陰性結(jié)果表示未檢出抗原，不一定表示樣本中無該抗原存在。待測抗原編碼基因變異、抗原低表達(dá)或抗原修復(fù)不當(dāng)?shù)?，都會造成抗原無法檢出。

9.6 本試劑僅對經(jīng)10%中性緩沖福爾馬林固定石蠟包埋的組織進(jìn)行了驗證（如適用），不得用于其它樣本類型或流式細(xì)胞檢測等其它用途。

10.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

詳述以下性能指標(biāo)：

10.1 免疫反應(yīng)性：詳述正常組織，相關(guān)良、惡性病變組織中的免疫反應(yīng)性。包括染色位置及染色特點。

10.2 精密度：詳述檢測內(nèi)精密度及不同適用機型（如適用）、檢測時間、檢測人員及批次的檢測間精密度。

10.3 臨床試驗數(shù)據(jù)總結(jié)。

11.【注意事項】

應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

11.1 有關(guān)試劑盒內(nèi)人源組份（如有）生物安全性的警告。

11.2 有關(guān)實驗操作中涉及試劑的安全性提示，包括對有毒有害物質(zhì)的防護(hù)及危險物品的處理方法等。